| 蛋白质纯化系统 |
| 发布人：汤玉 发布时间：2021-05-07 浏览次数:1124 |
仪器收费标准（院内、院外、校外）： 院内：50元/小时 院外：100小时 校外：200小时 技术参数： ◆ 流量范围：0.01 - 100 mL/min ◆ 压力范围：0 - 10 MPa，适于高压、中压分析及制备 ◆ 混合能力：全自动双泵系统，流速粒度高，剃度重复性高，自动缓冲液配置 ◆ 波长范围：190 - 700 nm，可实时连续检测3个波长 ◆ 实时pH监测器：2 - 12 ◆ 实时电导监测器：1 μs/cm - 999.9 μs/cm ◆ 样品自动收集器 ◆ 电脑及软件系统：外置电脑Window XP平台Unicorn软件，真正多界面操作，内置 150 多种样的预制程序，自动搜索功能 ◆ 技术特色：快速完成纯化生物分子蛋白
主要功能 ◆ 系统采用标准HPLC连接设计，可兼容正相层析柱，系统备有各类反相层析、疏水层析、离子交换、凝胶过滤，亲和层析和高效逆流色谱柱可供选择 ◆ AKTA purifier由Unicorn控制，不需要专门的色谱系统知识。通过向导程序编程，只要轻松勾选方框，程序就能运行 ◆ 快速优化、多波长检测、峰收集、准确结果比较、层析柱参数反馈。从进样、编程、分离、峰收集、数据处理以及打印报告皆自动化 ◆ 配合pH、电导在线检测，可完全掌握在线分离效果、污染物清除情况和鉴别产品 ◆ AKTA purifier采用UV-900检测器，实现三波长同时检测 ◆ AKTA purifier UPC采用UPC-900检测器，可单波长检测 应用 用于蛋白质、多肽、核酸、以及天然产物纯化；应用于蛋白质纯化研究以及药物开发，支持蛋白质的高通量、高纯度、高效率、全自动的纯化 仪器使用步骤及注意事项: 1. 准备工作 a. 将超纯水、预先配置好的缓冲液、20% 乙醇、氢氧化钠，用0.22 μm滤膜过滤。 b. 将待分离样品用 0.22 μm滤膜进行过滤。 c. 将对应的管路放入对应的缓冲液。 2. 启动层析系统 a. 连接好电源，先打开AKTA purifier蛋白纯化仪电源，再打开电脑，待电脑和纯化仪连接稳定后 ( 3 - 5 min ) ，打开UNICORN 5.11操作软件。 b. 排出缓冲液管路气泡。检查进液管路有无气泡，少量气泡可进行泵洗排气， 首先将管路滤头放入超纯水中，点击操作软件“system control”中“pump Instruction”操作菜单，然后在“pump” 中点击“pump wash Basic和Purifier” 同时选择待要排气的管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。 当管路中气泡仍未排除时，“manual” 操作菜单中点击“flowpath” 选择未排尽气泡管路，点击“execute”，用注射器在对应的泵头上方阀门处抽出气泡，点击“end”结束操作。 c. 管路液体置换。将使用的管路放进纯化水中，“manual” 操作菜单，然后在“pump” 中点击“pump wash Basic和Purifier” 同时选择管路，选择完成点击“execute”，泵洗结束点击“end”。 将管路放到对应的缓冲液中，置换成相应的缓冲液。 d. 连接层析柱。层析柱若是预装填柱，根据柱子说明书预先设定一个小的流速1 - 5 mL/min，“pump alarm” 设定压力，先接柱子上端，再接下端，拧紧柱子接头检查是否漏液。 3. 手动操作纯化样品 a. 平衡层析柱。通常用上样缓冲液平衡5个柱体积，Manual 操作菜单中“pump”设定流速，“flowpath” 设定选用的泵，“alarm” 设定检测波长、泵压，选择完成点击“execute”，平衡结束点击“end”。 b. 上样。上样量较少时选择样品环手动上样，样品环接到 injection valve 的2号位和6号位， 用注射器将样品由3号位注入，Manual 操作菜单中“flowpath” “Inject valve” 选定“inject”，择完成点击“execute”，上样结束点击“end”。 c. 方法洗脱及样品收集。冲洗未结合样品：用起始缓冲液冲洗未结合到层析柱上的样品，同时将未结合样品收集以备最后结果分析。 d. 样品洗脱和收集。Manual操作菜单中设定好流速、泵压力 ( 通常0.3 MPa ) 、检测波长等。在“pump” 中设定“gradient target B 100 %”各项参数。 “Frac”中设定收集器参数，“Man~fraction” 选定收集方式，“FracSize”设定每管收集样品量，选择完成点击“execute” 。 4. 编程操作 a. Method Editor 页面点击 Method wizard，main selection中选择填料类别，column 中选择柱子类型，column position中选择柱位。 b. 点击Next设置检测波长及缓冲液进口。 c. 点击 Next设置Equilibration 参数。 d. 点击 Next设置sample injection 参数通常选择 ( Manual/Sample direct loading ) 。 e. 点击 Next设置设置平衡过程中收集器收集流穿样品参数。 f. 点击 Next设置收集器收集洗脱样品参数。 g. 点击 Next 设置洗脱参数。 5. 注意事项 a. 实验结束时，应先用超纯水置换出所有管路的缓冲液，再用20 %乙醇置换出所有管路的水。应尽可能避免保存在装载缓冲液状态过夜。 尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚，如不能避免应于次日尽早用System Wash Method完成以蒸馏水将系统彻底清洗，才予以保存或再更新使用其它缓冲液再次投入使用进行实验操作。 b. 任何时间当不使用系统时，不要将pH电极留在流动池里。电极可作以下处理：流动池卸下pH 电极。先以蒸馏水冲洗一遍，轻拭水份后，使其末端以其合适溶液泡浸保存。 c. 若长时间不使用系统，除用蒸馏水彻底清洗系统外。取下柱和pH电极通过细管道替换柱，并安装虚拟pH电极 ( 如果使用 ) 。然后用20 %乙醇再冲洗所有使用的管件通道和所有的流动池一遍，然后并以此将系统保存。 UV 流动池也可以如上所述地用蒸馏水冲洗然后用20%乙醇通过流动池。 d. 每月定期保养处理或当发现假峰等问题出现时，可拆下柱子将所有的缓冲液入口管件置于1 M NaOH中，对所有的入口管件通路运行System Wash Method，以流速为每min 1 ~ 5 mL流速，将整个系统充分冲洗60 min。 e. 当收集器托盘或收集用的管子发生变化时，应及时调整运行程序中的相应参数，以免造成跳管或收集体积错误情况发生。 f. 注意要保持实验环境的清洁，以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏。 g. 各种缓冲液应现用现配，配好的缓冲液应过滤。 缓冲液和水不应放置时间太长，防止沉淀和长菌，缓冲液容器要定时清洗。 h. 清洗泵头循环使用的20%乙醇，每周应更换一次。 |
|||||||||||||||||
