双道荧光分析仪
发布人:高亚敏  发布时间:2021-05-07   浏览次数:256
双道荧光分析仪       预约

管理人员高亚敏、黄婷妹仪器型号
WALZ/GERMAN DUAL-PAM-100
联系电话54341017放置位置

闵行校区生物馆132

使用方向对外开放仪器状态
正常

       

仪器收费标准(院内、院外、校外):   

院内:30元/小时

院外:100元/小时

校外:200元/小时 


技术参数:

◆ 荧光测量光源(F ML):蓝光LED 460 nm

◆ P700测量光源(P ML):双波长LED,830 nm和875 nm

◆ 远红光源(FR):LED,720 nm

◆ 光化光源:AL:红色LED,635 nm,最大连续光强3000 μmol m-2 s-1 PAR; BL:蓝色LED,460 nm,最大连续光强1100 μmol m-2 s-1 PAR。

◆ 单周转饱和闪光(ST):红色LED,635 nm,最大闪光强度200000 μmol m-2 s-1,   PAR,5–50 s可调。

◆ 多周转饱和闪光(MT):红色LED,635 nm,最大闪光强度20 000 μmol m-2 s-1     PAR,1–1000 ms可调。

◆ P515/535激发光源:8个带干涉滤光片的白光LED,其中3个带550 nm干涉滤光片、4 个带520 nm干涉滤光片、1个带535 nm干涉滤光片,分别提供550 nm、520 nm和 535 nm的光。

◆ P515/535检测器:带特制脉冲信号放大器的PIN-光电二极管,1个带有5 mm蓝-绿滤光片。


仪器主要功能及应用:

1.主要功能

◆ 单独或同步测量叶绿素荧光和P700

◆ 可测荧光诱导曲线的快速上升动力学O-I-D-P相和O-J-I-P相

◆ 可测荧光诱导曲线的慢速下降动力学并进行淬灭分析(Fo, Fm, Fv/Fm, F, Fm’,      Fo’, Y(II), qP, qL, qN, NPQ, Y(NO), Y(NPQ)和rETR等)

◆ 可测P700诱导动力学并计算Pm, Pm’, Y(I), Y(ND)和Y(NA)等参数

◆ 可测两个光系统的光响应曲线和快速光曲线(RLC)

◆ 通过叶绿素荧光和P700的同步测量获知两个光系统的电子传递动力学、电子载体库的大小、围绕PSI的环式电子传递动力学等

◆ 通过测量P515/535信号变化测量跨膜质子动力势pmf及其组分跨膜质子梯度ΔpH和跨膜电位Δψ,“P515 Flux”信号能原位反映活体样品处于稳态的偶联电子和质子流动速率。 


2.应用                                                                        

主要用于光系统II与光系统I的电子传递过程的探讨及能量传递与耗散途径研究。通过测量活体叶绿素荧光和P700吸收变化来全面研究植物两个光系统的活性变化。可用于分析植物和藻类样品的测量叶绿素荧光和P700吸收变化。此外,通过特殊的激发-检测单元还可以测量叶绿体或微藻的许多重要光合参数,如跨膜质子梯度delta pH(通过9-AA荧光或吖啶黄荧光)、类囊体膜的电势(通过类胡萝卜素的差示吸收,“P515”)


仪器使用步骤及注意事项:

1. 诱导曲线的测量

a. 将样品暗适应20-30分钟。

b. 选择Settings选项,在Mode子选项中选择所需要测量的模式,单独测量PSII活性选择Fluo;单独测量PSI活性选择P700;同时测量PSII和PSI活性选择Fluo+P700。Analysis Mode选择SP Analysis。其他版块不需更改。

c. 在Meas. Light子选项中选择测量光ML强度,一般不需要更改。如单独测量P700或同时监测Fluo+P700时,需点击天平按钮进行调平,使得P700数值稳定且在0-0.2之间(可通过界面右下方P700数值边的上下键调节)。

d. 在Actinic Light子菜单中选择合适的光化光,高等植物普通测量一般选取100-300 umol/m2/s左右光强即可,即8-11档中间选择。其他不需更改

e. 查看或修改诱导曲线程序,在Slow Kinetics子选项中,修改AL Width可延长测量时间,一般而言不需要更改,只有当样品跑完后没有走平时才需要增加时间。

f. 查看饱和脉冲SP,在Saturate Pulse菜单中查看饱和脉冲,一般不需更改。

g. 选择Slow Kinetics主菜单,在右侧Start按钮上方下拉菜单中将Manual改为Ind. Curve,点击Start开始程序测量。

h. 测量结束后,如需保存图形,点击上方软盘按钮保存Report,点击绿色箭头按钮导出Excel格式图形。

i. 选择Report主菜单,点击左上方软盘按钮保存Report,点击绿色箭头按钮导出Excel数据报告。


2. 测量Light Curve

a. 测量此曲线无需进行暗适应,将样品夹在叶片夹上,点击Light Curve主菜单(如测量PSI的Light Curve需要在Meas. Light中点击天平平衡),点击“Edit”按钮,跳出对话框,此对话框共有四列,第一列为步数,即一    共可以跑20步;第二列为光强强度显示,即PAR值;第三列即光强梯度设置,我们一般选择从低到高的梯度,当然,并不是一定要按照依次顺序来选择档位,只需要由低到高即可;第四列为每一个梯度下光强照射的时间,      一般选择相同的时间; 

b. 设置完光强和照射时间后,按OK确认,并点击Start按钮,开始快速光曲线测量; 

c. 测量结束后,数据会自动导入到report中;仪器提供了两个不同的拟合曲线EP和Plat et al.,我们可以自由选择任意一个,并点击Fit作出拟合图,点击计算器图标生成计算数值,并手动抄写下来。

d. 测量结束后,如需保存图形,点击上方软盘按钮保存Report,点击绿色箭头按钮导出Excel格式图形。

e. 选择Report主菜单,点击左上方软盘按钮保存Report,点击绿色箭头按钮导出Excel数据报告。


3. 注意事项

a. 首次使用该仪器必须阅读说明书后在仪器负责人的监督下操作。

b. 如长时间不用机器,建议每个月拿出机器充电6小时,以保证电池的寿命。

c. 主机不能摔在地上,使用时需小心,强烈撞击会导致内部电路板脱落。

d. 使用仪器是尽量避免高温。

e. 禁止将比色杯放在藻类样品架上,然后再往里添加液体。

f. 仪器使用过程中禁止用眼睛直视探头的导光柱。