高效液相色谱
发布人:汤玉  发布时间:2021-05-07   浏览次数:740
高效液相色谱     预约

管理人员汤玉仪器型号
Agilent 1260 series
联系电话021-54341003放置位置

闵行校区生科院130

使用方向对外开放仪器状态
正常

       

仪器收费标准(院内、院外、校外):   

院内:40元/小时

院外:100元/小时

校外:200元/小时


技术参数:

◆ 流量范围: 0.05 - 5.00 mL/min ,最高耐压 600 bar

◆ 流量精度: ≤ 0.07% RSD 或 0.02 min SD 取较大值

◆ 延迟体积: 600 - 800 µL

◆ 进样范围: 0.1 - 100 µL

◆ 配备 DAD 检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器


仪器主要功能及应用:

主要功能

◆ 高效液相色谱是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析

应用

蛋白质、肽、多糖等等各种生物物质的检测及分析


仪器使用步骤及注意事项:

1. 开机

a. 依次打开脱气机、泵、自动进样器、柱温箱和检测器开关,仪器开始自检。 

b. 打开仪器控制电脑,双击化学工作站图标,打开软件,电脑自动与仪器 通讯。 在线软件用于仪器控制和方法设置,离线软件用于数据分析和图谱查看。


2. 仪器准备

a. 排气。配制流动相,用0.45 µm滤膜过滤,将流动相管路插到液面以下。打开purge阀,设定流速为5 mL/min,启动泵, 分别purge A泵和B泵,每个泵purge 3 min。关闭purge阀。

b. 色谱柱安装和平衡。按流路方向安装色谱柱,用初始流动相比例平衡柱子15 - 30 min,直到基线稳定。


3. 方法编辑和数据采集

a. 方法编辑:调取已保存的方法或新建方法。需要设置参数包括进样体积、样品盘温度、流速、梯度、时间、选择需要用的检测器、设置相应参数、柱温箱温控开启、设置柱温。方法设置完成后保存。

b. 数据采集:单针进样时点击状态栏单个样品瓶图标,编辑单个样品信息,点击确定,开始数据采集;序列进样时点击状态栏联排样品瓶图标,编辑序列上样的样品信息,保存后点击开始,开始数据采集。


4. 图谱查看和数据分析

a. 打开离线软件,从“视图”菜单中,单击“数据分析”进入数据分析画面。

b. 图谱查看:从“文件”菜单选择“选择信号”,选中你的数据文件名进行图谱查看。 

c. 色谱峰积分:自动积分-调整积分参数获得合适的色谱峰积分;手动积分-手动添加色谱峰起始和结束的位置,软件自动计算出峰面积,单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。


5. 实验结束

a. 实验结束后,用梯度方法冲洗色谱柱,最终将色谱柱保存在80%乙腈或甲醇溶液中。如流动相有无机盐,则先用100%超纯水过度半小时,再用80%乙腈或甲醇冲洗色谱柱。

b. 关闭柱温箱控温和钨灯,退出化学工作站及其它窗口,关闭计算机。 

c. 关闭液相色谱各模块开关。  


6. 注意事项

a. 流动相和样品必须用0.45 μm 的滤膜抽滤,超声后才可以上机。

b. 注意样品柱的选取和维护,上机接柱时不可以接反。

c. 实验完毕务必将系统用一定比例的有机相冲洗干净才可以关机。