流式细胞分选仪
发布人:余蔚明  发布时间:2021-07-14   浏览次数:58
流式细胞分选仪     预约
管理人员史书怡仪器型号

BD Biosciences/ FACSMelody

联系电话021-62233727放置位置

中山北路校区理科大楼B1802

使用方向对外开放仪器状态
正常

      

仪器收费标准(院内、院外、校外):

院内:300元/小时                

院外:500元/小时               

校外:600元/小时     


技术参数:

◆三根激光器:488nm蓝色激光器,640nm红色激光器,405nm紫色激光器;9个光电倍增管荧光检测器;前向角、侧向角2个散射光检测器。

◆检测参数:前向散射光、侧向散射光、9种荧光;11个参数检测。

◆荧光信号收集系统采用八角形和三角形连续全反射收集系统,减少荧光信号在传输过程中的损失,提高荧光灵敏度。

◆激发及分选方式,采用石英杯激发方式,非空气式激发;电荷式分选方式。

◆光路系统:应采用固定免调试光路系统,不用每天调试,开机后可处理样品。应采用全光纤化光路传递激光和收集荧光系统。

◆每次开机应在17分钟内完成,从开机到上样不超过17分钟。

◆流动检测池:光胶耦合物镜石英杯流动池。

◆荧光检测灵敏度:FITC ≤80ESF、PE≤30MESF。

◆标准分析速度:40000个细胞/秒。

◆分选纯度> 98%,适合十万分之一和百万分之一稀有细胞分选功能。

◆最小检测颗粒直径:0.5um。

◆一体化电荷式分选系统:在100um喷嘴下分选速度34000个细胞/秒,具有两路分选功能。可支持升级定量克隆分选系统,将定量细胞定位分选在微孔板(6、24、48、96和384孔)或载玻片等客户自定义收集装置上。

◆液滴时间延迟:通过激光器自动确定、实时监测液滴时间延迟;无需借助显微镜用肉眼观察进行繁琐的人工设定。

◆光学检测发生在喷嘴上方,调整喷嘴后无需调整光路或液路。

◆荧光补偿模式: 智能荧光补偿,无需每次都做补偿实验。增加荧光染料无需再做补偿、不同机器间补偿条件可通用。

◆数据处理系统:全数字化数据处理。

◆分析软件:可脱机进行全数字化分析、处理。

◆可对任意测量参数的脉冲信号进行宽度、高度及面积的测量。

◆能自动完成开关机仪器的清洗工作,可对液流自动监测并有堵塞报警功能。

◆温度控制系统:进样系统的温度由软件控制,可调节为4、20、37、或42度。

◆具备完善的CS&T智能全程质控系统。

◆符合环保要求:仪器可自动供压,不需要额外的供气装置,不需要水冷却系统。

◆可放置在普通实验室内,无需特殊的洁净环境,仪器在环境温度发生变化时无需调校。


仪器主要功能及应用:

主要功能

流式细胞分选仪是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。作为一台具有分选功能的仪器,流式细胞仪可以快速的将样本中的多种细胞分离开,分选后得到的细胞不仅具备非常高的纯度,同时还能维持细胞活性,以满足后续实验要求。

应用

PCR、 鉴定、 蛋白提取、 细胞治疗研究等等,可应用于在肿瘤、免疫学、表观遗传学、血液学、干细胞及细胞治疗、微生物、药物研发等方向上。


仪器使用步骤及注意事项:

使用步骤

1、确保房间温度控制在 22°C+/-1.5°

2、开机前开启压力泵,检查压力表的读数是否大于 100Psi。

A, 检查鞘液桶是否满,千万不要用摇晃鞘液桶来判断鞘液的多少,打开鞘液桶的盖子检查鞘液的量;

B, 或通过软件检查剩余时间。

3、添加鞘液时千万不要超过鞘液桶的提示线,同时要离提示线至少 0.5 厘米((建议使用 BD

公司的 FACS Sheath,否则会导致CS&T 失败)。

4、检查废液是否满,至少留 2/3 的可用空间。

5、开启电脑,用户名:BDAdmin 输入密码“BDIS#2$$”输入密码“BDIS#1”,

6、打开Electronic Box 总开关,按下仪器前的红色电源开关;

7、打开 T-Term 程序,观察里面有没有报错信息,等待 5-7 分钟后会听到鞘液桶加压的声音,当压力达到 23 PSI 后,再打

开 BD FACSChorus 软件。不能开启电源后立刻打开软件,否则可能无法联机。输入用户名及密码(工程师设置)登陆;

8、仪器自动进行系统启动,显示“connected”,表明联机成功;

9、打开左边菜单下方的“Stream”,观察图像上是否有漏水现象,如果漏水用干棉签将水吸干,千万不要上下左右用力,特别注意不要擦洗右边的小窗,用棉签蘸水轻微擦洗喷嘴下方,最后用干棉签将水吸干。

10、启动液流,根据仪器上次关机时间,24 小时以内的选择“Run Daily Fluidics Startup”,超过三天以上,请执行“Run Extended Fluidics Startup”。

11、当各项任务完成后,点击“Close” “Continue”进入下一界面,选择“Flow Cell Clean”,按照提示操作,清洗流动室;

 12、完成后点击“Close” “Continue”,按照提示移除闭合喷嘴,拔出 closed Nozzle,用清水清洗一下,擦干插入储存处。

13、将喷嘴超声 20 秒,取出用纸吸干喷嘴周围的水。喷嘴插入时不要太用力,以免损伤喷嘴上的O 圈。插入超声清洗后的喷嘴,点击“Continue”;

 14、检查液流车上的鞘液过滤器是否有气泡,如果有将气泡排掉。

15、点击 Continue 执行开液流指令,调整废液槽位置,使液流流入收集槽的中间(见下图。)

16、开启液流后,根据提示,确认 CST 微球批次文件选择正确,500ul 鞘液加两滴 CST 微球配制好 CST 试剂

1)将 CST 放入上样仓,点击 Run Cytometer Setup 开始质控程序如下图

2) 等待完成后,显示“Cytometer Setup completed successfully”,点击“Continue”;

17、将配制好的 Accudrop beads 放入上样仓,测定 drop delay

1) 样本制备:向 1ml 鞘液中加入 1 滴混合均匀的 Accudrop 荧光微球;

2) 点击“Run Drop Delay”;

3) 上样品管,点击“Continue”;

4) 等待完成后,显示“Drop Delay completed successfully”,点击“Continue”进入主界面。

注意事项

1.弃掉试管中上清液时,一定保证次性垂直倒不能反复倾防止细胞丢失。

2. 2~8℃保存抗体试剂 在保质期内稳定,不能冻存。抗体间以及细胞孵育时应注意避光。 试剂瓶应保持干燥避光。 

3. 任何试剂的外观改变,如沉淀、色都表明不稳定这时能使用。 

4. 为得到理想结果,血样应在静脉穿刺后6h内染色

5. 操作时如未按指定的孵育间、离心次数或温度进行,容易发生错误

6. 抗体试剂虽含有叠氮钠保护,仍需注意微生物污染以免导致错误结果。