高通量实时荧光定量PCR仪
发布人:黄婷妹  发布时间:2021-07-24   浏览次数:527
 高通量实时荧光定量PCR仪     预约

管理人员黄婷妹、汤玉仪器型号
罗氏 Light cycler 480II
联系电话021-54341017放置位置

闵行校区生科院132

使用方向对外开放仪器状态
正常

      

仪器收费标准(院内、院外、校外): 

院内:40.0 元/小时 
院外:80.0 元/小时  
校外:160.0 元/小时

           

技术参数:
◆温度均一性:±0.1℃
◆可检测荧光染料:SYBR Green I, Hex, CyCyan 500, FAM, VIC等
◆样品孔数:384个
◆动力学范围广:可同时检测到1-10E10个拷贝DNA
◆高分辨率:轻松区分1000与2000拷贝浓度差异
◆高速:40分钟完成40个PCR循环(384孔板)


仪器主要功能及应用:

1.主要功能
可以实时在线进行高通量快速荧光定量PCR循环,可检测384孔板样品。结果可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析。复杂的光学检测系统可以进行多重PCR检测,并适用于多种检测模式用于基因表达分析研究,对目的基因的定量分析,进行SNP单核苷酸多态性和突变位点的分析检测。
2.应用
◆非序列依赖的探针模式(SYBR Green I或其他饱和荧光染料)
◆序列特异的探针模式(Taqman水解探针模式,杂交探针模式,简单探针模式,分子信标,Scorpions等模式)
◆通过高分辨率熔解曲线分析(HRM)进行基因扫描突变检测,产物分型和SNP研究


仪器使用步骤及注意事项:

1.使用步骤
a.主机提前开启预热,开关在后方。。
b.按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成384 孔盘,注意板缺口向右下角。封闭膜要刮板器刮平。
c.开计算机:user,ok;LightCycler 480软件打开:账号和密码贴在仪器旁边
d. 软件开启后,会进入主画面。点选 “New Experiment”,出现实验设定窗口:
a)在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Format, 另外可再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。
b) 输入反应体积: 384 well plate 范围为 5-20 ul。
c)设定实验步骤 (Program):
首先:设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR)  program设定成 『Quantification』,而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。
d)设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同):点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤,请根据产品说明书来设定。需要设定的参数包含 Target (℃) 目标温度,Acquisition Mode (荧光侦测模式),Hold (hh:mm:ss) 停留时间。Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度。注意:若设定温度低于 50℃,请把 Ramp Rate 调整成 1.5℃/s (96 well) 或 2.0℃/s (384 well)。
e) 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。
f) 若要进行套用时,请直接点选窗口左下角 “Apply Template” ,选择欲套用之实验步骤即可。
g) 设定完成后点选 “Start Run”  开始进行实验.
h) 跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。
2.注意事项
a.实验完毕请将样品板带走,勿留在仪器内。
b.进板或者出板请勿用手协助,以免引起程序混乱出错。