蛋白纯化仪
发布人:黄婷妹  发布时间:2021-07-25   浏览次数:318
蛋白纯化仪   预约

管理人员汤玉、高亚敏仪器型号
GE AKTApurifier10
联系电话021-54341017放置位置

闵行校区生科院132

使用方向对外开放仪器状态
正常

      

仪器收费标准(院内、院外、校外): 

院内:40元/小时 
院外:100小时 
校外:200小时

           

技术参数:

◆流速 0.001-10 mlLmin
◆压力 0-25 MPa(3650psi)
◆AKTApurifier 100
◆流速 0.01-100 mlLmin
◆压力 0-10 MPa
◆UV 检测 190-700 nm 同时 3 波长
◆电导检测 1 μSLcm - 999.9 mSLcm
◆p H 检测 2-12
◆阀门 8 通道缓冲液切换阀
◆8 通道大组分切换阀



仪器主要功能及应用:

1.主要功能
用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质。
2.应用
适用各种层析技术,专门分离和纯化各类生物分子,包括天然蛋白质,重组和融合蛋白质、肽、寡核酸、质粒、病毒、抗生素、生物碱等等,操作肽图等精确分析和小量制备应用。


仪器使用步骤及注意事项:

1.操作步骤
a.开机
打开仪器的主电源,打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。
b.准备工作溶液和样品
所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
c.清洗及管道准备
首先将A1管道放入缓冲液或平衡液,binding buffer中,将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择 pump→pump wash basic,选中A1,B1管道为ON, execute。泵清洗将自动结束。
d. 安装层析柱
在manual里选择pump→flow rate,输入流速1ml/ml,insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm(输入填料的耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
e.开始纯化
  a)等待柱子平衡好了(观察电导COND,pH的数值和变化趋势)就准备上样了。此时将紫外调零,选择Alarm&mon→autozero,exectue。
  b)用样品环上:将样品吸进注射器,推掉气泡,从injectionValve的3号位推入(进样量不得低于样品环的体积的2倍)推好后不要取下注射器。在manual里选择flowpath→injectionValve→inject,execute。
  c)用泵上样:点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
  b,c)选择一种方式
  d)洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient,按照自己的工艺选择targetB(100%)和length(10CV)。
  e)设定收集:选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue。
f. 清洗泵及卸下层析柱
将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。
g. 关闭电源
从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源。
2.注意事项
a.所有缓冲液和样品必须抽滤并且超声才可以上机。
b.实验过程中时刻关注漏液情况,如漏液请检查各个端口是否拧紧。
c.样品层析柱请正确使用。
d.实验完毕请彻底清洗柱子和系统。